子宫内膜癌组织核受体共激活因子SRC1和SRC3表达及意义

【摘要】 　　目的 研讨核受体共激活因子SRC1和SRC3蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义。办法 应用免疫组化SP法，检测20例正常子宫内膜、10例不典型增生内膜及50例子宫内膜癌组织中SRC1和SRC3蛋白的表达程度。结果 子宫内膜癌组织中SRC1和SRC3蛋白阳性表达率均高于不典型增生内膜和正常子宫内膜,差别有显著性(χ2=6.562、6.743,P<0.05);且3种组织间SRC1和SRC3蛋白表达强度不同,差别有显著性(H=11.215、27.956,P<0.05), 在子宫内膜癌中呈过度表达,不典型增生内膜中为高表达,正常内膜为弱表达或不表达。 SRC1和SRC3蛋白表达与肿瘤的病理类型、手术病理分期、组织学分级和淋巴结转移无关(P>0.05),但雌激素受体(ER)阳性组SRC1和SRC3蛋白表达高于ER阴性组(χ2=3.900、4.258,P<0.05)，且在子宫内膜癌中SRC1和SRC3表达与ER表达呈正相关(r=0.472、0.389,P<0.05)。SRC3蛋白表达与肿瘤组织的肌层浸润深度有关(χ2=5.348,P<0.05)。结论 SRC1和SRC3过多表达可能与子宫内膜癌的发作开展有关。

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　　【关键词】 子宫内膜肿瘤　SRC1蛋白　SRC3蛋白　免疫组织化学

　　EXPRESSIONS OF NUCLEAR RECEPTOR COACTIVATORS SRC1 AND SRC3 IN ENDOMETRIAL CARCINOMA

　　ZHANG LIFANG, GUO XINHUA

　　(Department of Obstetrics and Gynecology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China);

　　[ABSTRACT] Objective To study the protein expressions of nuclear receptor coactivators SRC1 and SRC3 in endometrial carcinoma (EC) and their clinical significance. Methods The expressions of SRC1 and SRC3 in endometrial tissue were examined with immunohistochemistry SP method in 20 cases of normal endometrium, 10 cases of hyperplastic endometrium, and 50 cases of EC. Results The positive expression rates of SRC1 and SRC3 proteins in EC were significantly higher than that in hyperplastic and normal endometrium (χ2=6.562,6.743;P<0.05). The expression intensity of SRC1 and SRC3 proteins were significantly different among the three groups (H=11.215,27.956;P<0.05), with excessive expression in EC, high expression in hyperplastic endometrium, weak or nonexpression in normal endometrium. The expressions of SRC1 and SRC3 proteins were not related to pathological type, pathological stage, histological grade and lymphatic metastasis (P>0.05). Those showing positive estrogen receptors (ER) had higher expressions of SRC1 and SRC3 than those with negative ER expression (χ2=3.900,4.258;P<0.05). SRC1 and SRC3 expressions in EC were positively correlated with ER expression (r=0.472,0.389;P<0.05). The expression of SRC3 protein was related to the infiltration depth of carcinoma into myometrial tissue (χ2=5.348,P<0.05). Conclusion The overexpressions of SRC1 and SRC3 protein may associate with the occurrence and development of EC.

　　[KEY WORDS] endometrial neoplasms; SRC1 protein; SRC3 protein; immunohistochemistry

　　子宫内膜癌是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一[1]。子宫内膜癌的发作开展是一个多要素、多阶段、多基因变异累积的复杂过程。多数学者以为，子宫内膜癌的发病与雌激素有关，是雌激素依赖性肿瘤。且有研讨结果显现，子宫内膜癌中雌激素受体(ER)的表达明显高于正常子宫内膜组织，揣测子宫内膜癌的发作与ER的关系亲密[2]。而作为ER信号转导通路中的重要元件核受体共调理蛋白因子能否也在肿瘤的发作开展中起作用呢?颇多国内外学者对它们停止了研讨，以为多种核受体共调理蛋白因子在肿瘤的发作开展中起作用。SRC家族是核受体共调理蛋白因子中具有代表性的因子，本研讨应用免疫组化的办法研讨SRC家族中的SRC1和SRC3在子宫内膜癌中的表达状况，以初步讨论它们与子宫内膜癌发作开展的可能关系。

　　1 资料与办法

　　1.1 资料及其来源

　　子宫内膜癌组织标本50例均来自青岛大学医学院隶属医院病文科，为2006年6月—2007年12月手术切除、临床材料完好的石蜡包埋组织，病人年龄27～70岁，均匀46岁。按FIGO(2000)规范停止手术病理分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期8例，Ⅲ期6例，Ⅳ期6例;组织学分级：G1期16例，G2期26例，G3期8例;组织学类型：子宫内膜样腺癌40例，其他病理类型10例。同时，选取同期因其他缘由行子宫切除的正常子宫内膜组织20例，其中增生期10例，分泌期10例;门诊行分段诊刮病人内膜组织标本中不典型增生内膜10例。一切病人在取标本前未承受过放疗、化疗或性激素治疗。齐鲁医学杂志2010年4月第25卷第2期 Med J Qilu, April 2010, Vol.25, No.2

　　1.2 SRC1和SRC3蛋白表达检测办法

　　采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法。SRC1和SRC3抗体均购自美国Santa Cruze公司,SP免疫组织化学试剂盒为北京中杉生物技术有限公司产品。一切石蜡包埋标本以3 μm厚度切片，每个标本切片两张,70 ℃烤箱作用6 h后,二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水,体积分数0.03过氧化氢封锁内源性过氧化物酶,微波抗原修复20 min,自然冷却后,PBS液冲洗3次。分别加SRC1和SRC3抗体(SRC1为鼠抗人单克隆抗体,SRC3为山羊抗人多克隆抗体,稀释度均为1∶50),37 ℃孵育2 h, PBS液冲洗后,再加即用型生物素化的二抗(SRC1为兔抗鼠二抗,SRC3为鼠抗山羊二抗), 37 ℃孵育30 min, PBS液冲洗,DAB显色并适时终止。苏木精复染,脱水透明,中性树胶封片，最后显微镜下察看。用已知阳性的乳癌标本作为阳性对照,用PBS液替代一抗作为阴性对照.

　　1.3 结果判别规范

　　细胞染色以胞浆和(或)胞核呈现棕黄色颗粒为阳性反响，阳性判别采用SINICROPE改进法[4]。200倍显微镜下计数5个视野，依据染色细胞所占比例计分5级，0分：<5%,1分：5%～25%,2分：26%～50%,3分：51%～75%,4分：>75%。染色强度计分，1分：弱染色，2分：中度染色，3分：强染色。每份切片计分=细胞染色数分数×染色强度分数，所得分数<1为阴性结果，反之为阳性。

　　1.4 统计学办法

　　采用SPSS 11.0及PPMS 1.5[5]统计学软件停止数据处置，数据间比拟采用卡方检验和H检验，相关性采用Spearman等级相关剖析。

　　2 结果

　　2.1 SRC1和SRC3蛋白在3种组织中表达比拟

　　SRC1蛋白阳性染色位于腺上皮细胞及癌细胞的胞核内,呈黄褐色洋溢性散布,少数为细胞质染色。 而SRC3蛋白阳性染色主要位于腺上皮细胞及癌细胞的胞质内,呈黄褐色洋溢性散布,少数为细胞核染色。 SRC1和SRC3蛋白在正常子宫内膜、不典型增生内膜和子宫内膜癌组织中阳性表达率比拟,差别有显著性(χ2=6.562，P<0.05)。 且3种组织间SRC1和SRC3蛋白表达强度不同,差别有显著性(H=11.215、27.956,P<0.05),二者在子宫内膜癌中呈过度表达,在不典型增生内膜中为高表达,正常内膜中为弱表达或不表达。见表1。 表1 3种内膜组织SRC1和SRC3蛋白表达的比拟(略)

　　2.2 SRC1和SRC3蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系

　　子宫内膜癌组织中SRC1和SRC3蛋白的表达程度与肿瘤的手术病理分期、病理分级、病理类型及有无淋巴结转移均无相关性(P>0.05);ER阳性的子宫内膜癌较阴性者SRC1和SRC3蛋白的表达程度明显升高，差别有显著性(χ2=3.900、4.258,P<0.05), 且在子宫内膜癌中SRC1和SRC3的表达与ER表达呈正相关(r=0.472、0.389,P<0.05)。 SRC3在肌层浸润深度≥1/2子宫内膜癌中阳性表达率高于肌层浸润深度<1/2的子宫内膜癌组织，差别有显著性(χ2=5.348,P<0.05)。而SRC1蛋白在肌层浸润深度≥1/2子宫内膜癌和<1/2的子宫内膜癌组织中阳性表达率比拟，差别无显著性(χ2=1.29,P>0.05)。见表2。表2 子宫内膜癌中SRC1和SRC3蛋白表达与临床病理特征的关系(略)

　　3 讨论

　　SRC家族为众多的辅助激活因子中较为重要的一类，目前已知有3种，即SRC1、SRC2、SRC3，它们的基因分别定位于人类染色体2p23、8q21、20q12 以及小鼠染色体12AA31、A3A52、H2H4区域[6]。它们以配体依赖的方式与核受体互相作用,经过受体的甲基化或乙酰基化以及其他一些辅助因子等的参与来进步核受体基因的转录活性。SRC蛋白家族主要对类固醇受体如雌激素受体、孕激素受体、甲状腺素受体以及糖皮质激素受体等发挥转录调理作用，对机体的生长、发育以及生殖产生重要的影响[7]。SRC1是SRC家族中最早被克隆的基因，在正常组织中普遍表达，可能也在某些肿瘤的发作开展中起作用，固然SRC1基因表达缺乏不会招致任何相关疾病的发作或发育障碍，但研讨发现SRC1过度表达与乳癌相关[8]。SRC3是在寻觅乳癌中频繁扩增的基因时发现的一种基因，它在很多组织中表达，但乳腺和卵巢中表达最高。近年来研讨显现，SRC3可能作为一种致癌因子与多种肿瘤的发作开展有关，如乳癌、卵巢癌、前列腺癌等。

　　本实验应用免疫组化SP法检测了SRC1和SRC3蛋白在子宫内膜癌中的表达，结果显现，子宫内膜癌中SRC1和SRC3蛋白阳性表达率显著高于不典型增生内膜和正常子宫内膜,且3种组织间蛋白表达强度不同,在子宫内膜癌中呈过度表达,不典型增生内膜中为高表达,正常内膜为弱表达或不表达。 阐明SRC1和SRC3蛋白的增高发作在子宫内膜癌中早期，可能为促癌变要素之一。KERSHAH等[9]研讨也以为，癌变内膜组织中SRC1和SRC3表达明显高于正常内膜，呈过度表达状态，以为二者可能在癌变发作过程中发挥促进作用，为促癌变要素之一。本文结果显现，SRC1和SRC3蛋白表达的部位不同，SRC1以细胞核为主，SRC3以细胞质为主。

　　本文分离子宫内膜癌临床病理特征研讨显现，SRC1和SRC3蛋白在ER阳性的子宫内膜癌中的表达明显高于ER阴性的子宫内膜癌。阐明SRC1和SRC3蛋白固然有多种致肿瘤途径，但在许多雌激素敏感的肿瘤如乳癌、子宫内膜癌中，雌激素受体途径在肿瘤的癌变过程中发挥重要作用[10]。本文SRC3蛋白表达与子宫肌层的浸润深度具有明显的相关性，阐明过度表达的SRC3可能参与细胞的异常生长增殖，对肿瘤的构成及其部分侵袭才能具有一定的促进作用[11]。由此我们能够以为，在子宫内膜癌组织中SRC3表达程度越高，其深肌层浸润的可能性越大，因肌层浸润深度自身就是子宫内膜癌预后不良的要素之一，能够分离其他预后不良的高危要素综合判别预后及指导临床治疗。本文未得出子宫内膜癌组织中SRC1和SRC3蛋白的表达程度与肿瘤的手术病理分期、病理分级及有无淋巴结转移有相关性的结论，提示它们可能不参与肿瘤细胞的分化及恶性转移过程;同时，组织学类型也不是SRC1和SRC3蛋白过高表达的相关要素，可能缘由是由于其他类型子宫内膜癌临床相对少见，本研讨中样本材料较少可能使实验结果产生偏向。因而，需求我们搜集更多的病例数，停止更多的相关临床研讨。

　　综上所述，SRC1和SRC3在肿瘤的发作开展中发挥了一定的作用，但其详细作用机制尚不分明。有必要展开进一步研讨以讨论其在妇科肿瘤中表达状况及可能的致肿瘤构成机制。

　　【参考文献】

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