激光辅助孵化对高龄妇女体外授精-胚胎移植妊娠结局的影响
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【关键词】 人类胚胎；激光；辅助孵化
Effects of assisted hatching on pregnancy outcome of advanced age women following in vitro fertilization-embryo transfer
HUANG Ping，LIU Wei-xin，WANG Li，et al.Chengdu Institute of Family Planning，Chengdu 610031，China
［Key words］ human embryo;laser;assisted hatching
在体外授精-胚胎移植（IVF-ET）过程中，胚胎种植率较低不断障碍着辅助生育技术的开展，囊胚扩张后透明带不能决裂招致胚胎孵出艰难是胚胎种植失败的缘由之一［1］。体外培育和胚胎冷冻过程可能会招致透明带硬化，从而影响囊胚的孵出和种植［2］。辅助孵化（assisted hatching，AH）是将胚胎透明带停止处置，协助胚胎从透明带中孵出的技术。有研讨报道辅助孵化能有效进步高龄妇女和IVF失败妇女IVF-ET的胜利率［3，4］。但是，也有研讨以为辅助孵化不会进步高龄妇女体外受精的胜利率［4，5］。虽然停止辅助孵化降生的试管婴儿数量在不时增加，但对辅助孵化能否有明显效果还尚有争论。目前用于辅助孵化的技术有机械、化学、酶、激光等办法。但是无论采取何种办法在透明带上打孔均有可能招致囊胚孵出艰难和单卵双胎率增加［6］。Palmstierna等研讨以为，透明带变化率大的胚胎种植率明显进步，于是尝试使透明带局部区域变薄来协助囊胚扩张孵出［7］。本文回忆性剖析激光透明带局部薄化处置对高龄妇女体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响。
1 材料与办法
1.1 普通材料 选择2001年1月～2005年12月，在成都市方案生育技术指导所生殖医学中心75例38岁以上患者停止体外受精-胚胎移植79个周期。一切患者随机分红2组，Ⅰ组包括38个周期（37例患者），采用激光辅助薄化胚胎透明带；Ⅱ组（对照组）包括41个周期（38例患者）没有停止辅助孵化。
1.2 控制性超促排卵和体外授精 患者用促性腺激素释放激素冲动剂（GnRH-a，Serono，Switzerland）和人绝经期促性腺激素（hMG，Pergonal，Serono），采用长计划或短计划停止超促排。当发现3个或以上主导卵泡直径达16～18 mm时，注射人绒毛膜促性腺激素（HCG，Profasi，Serono）。注射HCG 36～38 h后，阴道B超引导下穿刺卵泡采集卵母细胞。IVF和ICSI过程采用常规办法［8］。
1.3 激光辅助孵化 胚胎移植当天，用计算机控制的1.48 mm波长的二极管激光器（OCTAX Laser ShotTM System，Germany）。二极管激光器衔接在Nikon TE 300倒置显微镜的物镜下［9］。胚胎透明带薄化采用映照时间为12 ms的激光盘绕透明带外缘做连续不超越6次的映照，在透明带上产生一个长约80 μm，厚约透明带总厚度的50%～80%的薄化区［6］。胚胎用HTF液洗濯数次，并转入37 ℃、5% CO2培育箱中培育直到移植。
1.4 胚胎移植、临床妊娠和胚胎植入率 依据Steer等［10］报道的评分规范停止胚胎分级，只要Ⅰ～Ⅱ级胚胎才用于胚胎移植和冷冻。胚胎移植在取卵后第3天用KJET-3005（COOK，Australia）移植管停止。不超越3个胚胎移植入子宫内。用孕激素、雌激素或HCG停止黄体支持。移植后2周检测β-HCG，当连续两次（距离2天）测定β-HCG程度升高，则能够以为生化妊娠。胚胎移植后4周B超检查能否有孕囊和胎心肯定能否临床妊娠。胚胎植入率是B超下所见孕囊数占移植胚胎数的比率。
1.5 统计学办法 采用SPSS软件对数据停止处置，行t检验和χ2检验，P＜0.05表示差别有统计学意义。
2 结果
从本组研讨能够看出，激光辅助孵化组与对照组间在夫妻双方年龄、取卵数、受精率、卵裂率、胚胎移植数方面差别没有统计学意义（P＞0.05）。但是采用激光辅助薄化胚胎透明带后，胚胎植入率和临床妊娠率显著高于没有停止辅助孵化者（P＜0.05）。见表1。 表1 激光辅助孵化对IVF-ET妊娠结局的影响
3 讨论
透明带具有包绕卵母细胞和胚胎的无细胞构造，在卵母细胞受精时促进精卵分离并阻止多精受精，在种植前阶段维护胚胎细胞免受病菌及免疫细胞损害并维持其三维构造完好性的功用。胚胎在体外培育过程中，培育基、培育时间延长会招致透明带硬化。辅助孵化经过在透明带上打孔或薄化透明带，可克制由于透明带变厚变硬而形成的机械障碍，减少生机缺乏胚胎孵出时的能量需求；同时与生理周期相比，承受卵巢刺激的患者种植窗提早，而体外培育胚胎发育落后于体内培育胚胎，辅助孵化允许胚胎较早孵出，在种植窗关闭前种植［1］。
目前胚胎辅助孵化能够采用机械、化学、激光等技术停止。Cohen等1992年报道，用酸辅助孵化胚胎能进步种植率［2］。Mansour等研讨发现，在移植前用Tyrode酸将透明带完整去除，可显著进步妊娠预后不良患者的妊娠率［11］。激光为胚胎辅助孵化提供了一种烦琐、快速、平安的途径。Hsieh等的临床研讨标明，激光法在进步高龄妇女妊娠率上优于化学法［12］。Antinoril等报道，激光辅助孵化能有效进步IVF-ET预后不良患者胚胎移植的临床妊娠率和胚胎种植率［13］。Balaban等2006年报道，激光辅助孵化能有效进步人类冷冻胚胎移植的临床妊娠率和胚胎种植率［14］。但是，Balaban等2002年则以为关于经选择的患者，采用机械法、化学法、激光法和酶消化法四种辅助孵化办法对胚胎种植率和临床妊娠率没有显著影响［15］。同时，也有研讨以为激光辅助孵化不能进步人类冷冻胚胎的种植潜力［16］。
无论采取何种办法在透明带上打孔均有可能招致囊胚孵出艰难合单卵双胎率增加，同时打孔后病菌与抗原可能损害胚胎［7］。研讨者以为透明带变化率大的胚胎种植率明显进步，于是尝试运用透明带薄化处置来协助囊胚扩张孵出。采用激光对胚胎进薄化处置发现，胚胎发作了自然薄化，囊胚孵出率明显高于未处置组［6］。很多研讨者以为辅助孵化能有效进步高龄妇女（≥38岁）、冷冻胚胎移植、卵巢反响差、IVF失败（≥2次）透明带较厚妇女IVF-ET的胜利率。但是，也有研讨以为辅助孵化不会进步高龄妇女体外受精的胜利率［5，17］。该回忆性剖析标明，在女方年龄、男方年龄、取卵数、受精率、卵裂率、移植胚胎数没有显著性差别的条件下，在胚胎移植前，采用激光薄化处置胚胎透明带的胚胎植入率和临床妊娠率得到了显著进步（表1）。
实考证明了采用激光辅助薄化处置胚胎透明带对进步临床高龄妇女胚胎移植的临床妊娠率和胚胎植入率有显著影响。而且激光辅助薄化技术操作快速、便当、可控制、对胚胎的影响小，因而在临床中能够作为辅助孵化的一种有效方式。
【参考文献】
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