犬Oddi括约肌狭窄模型的建立及其胆道动力学的变化

【摘要】  目的 树立犬Oddi括约肌(sphincter of Oddi，SO)狭窄模型，讨论其胆道动力学的变化。办法 禁食16～18 h成年杂种犬麻醉后，超声丈量胆总管管径。实验组行经腹切开十二指肠，机械性损伤SO致其狭窄；对照组仅行经腹切开十二指肠，术毕饲养。定期检查肝功用，4周后再次麻醉下行超声丈量胆总管管径及开腹行SO测压。最后切取SO及四周组织行病理检查。结果 实验组术后4周肝功用TBIL、DBIL、GGT、ALP明显高于术前，超声丈量胆总管管径大于术前，病理检查发现括约肌组织纤维化，而对照组均无明显变化。与对照组相比，实验组胆总管及SO根底压明显升高，SO收缩幅度降低，收缩频率升高，收缩时间缩短。结论 SO狭窄模型胜利树立；Oddi括约肌狭窄后其胆道动力学发作明显改动。

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【关键词】  Oddi括约肌； 狭窄； Oddi括约肌测压； 胆道动力学

   Establishment of dog models of sphincter of Oddi stenosis and their biliary dynamic changes  LI Baoshan*, LI Zhihua, LIU Yongkang, YU Jianfeng, HE Zhonglin, LI Xiaowu, XU Shirong.*Southwest Hospital & Institute of Hepatobiliary Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China

    Corresponding author: LI Zhihua, Email: zhli_tmmu@163.com

    【Abstract】  Objective  To establish models of sphincter of Oddi (SO) stenosis to observe their biliary dynamic changes in dogs. Methods  After fasting for 16-18 hours, the adult mongrel dogs were anesthetized and performed with ultrasonograph to determine the size of the common bile duct (CBD). In the experimental group, the dogs\'SO accepted mechanical damage by dissecting duodenums of the dogs. While in the control group, only sham operation was done. Liver function was checked periodically by serum examination. All dogs accepted ultrasonograph and sphincter of Oddi manometry (SOM) to determine the size of CBD and biliary dynamics respectively at postoperative four weeks. Biopsy of SO and adjacent tissue was done for pathological analysis after the second operation. Results  In the experimental group, the levels of TBIL, DBIL, GCT, and ALP were higher than those before operation, and the size of CBD was larger than that before operation. SO fibrosis was found in the experimental group by pathology but not in the control group. Compared with the control group, there could be found significant increase of basal pressures of CBD and SO, decrease of the amplitude of SO and increase of the frequency of SO contraction in the experimental group. Conclusions  The SO stenosis model is established successfully, when the stenosis of SO causes significant changes of biliary dynamics, with increase of basal pressure and contraction frequency, decrease of amplitude and shortening of contraction time.

    【Key words】  Sphincter of Oddi;  Stenosis;  SO manometry;  Biliary dynamics

    Oddi括约肌功用失调或障碍(sphincter of Oddi dysfunction,SOD)可能是胆道、胰腺及胃肠道疾病发作的重要诱因之一。近有学者倡议将其分为Oddi括约肌(sphincter of Oddi,SO)狭窄和SO功用紊乱两种状况［1］。前者为括约肌的局部或全部狭窄，由慢性炎症和纤维化所致；后者为括约肌高压带的周期性功用阻滞,是括约肌痉挛、肥大或去神经所致。在理论中两者很难辨别，统称SOD。本实验经过人为机械性损伤，模拟临床SO狭窄产活力制，制造犬SO狭窄模型，讨论器质性狭窄对胆道动力学的影响，总结规律，为临床SOD的诊断提供根据。

    1  资料与办法

    1.1  资料

    1.1.1  实验动物：安康成年杂种犬16只，雌雄不限，体质量11～13 kg，由第三军医大学动物实验中心提供。随机分为实验组和对照组，每组8只。

    1.1.2  实验仪器：SOM系统、三腔测压管购自美国WilsonCook Medical公司；PC polygram HR高分辨、多通道胃肠功用测定仪购自瑞典CTDSynetics Medical公司；自制的损伤工具由ERCP造影管不规则缠绕铜丝改制而成。

    1.2  办法

    1.2.1  动物模型的树立：实验犬禁食18 h(可自在饮水)，速眠新与氯胺酮肌注复合麻醉(按体积比3∶2配药，给药量0.15 ml/kg)后固定于手术台上［2］，右侧肋缘下切口进腹。实验组均行十二指肠系膜对侧切开十二指肠，寻觅乳头，自制损伤工具插入胆道人为机械性损伤SO(伸拉各10次，模仿排石过程)后缝合十二指肠，关腹。术后禁食、抗炎、补液2 d，相同条件下饲养4周。对照组仅行开腹十二指肠切开缝合术，不做损伤，其他操作同实验组。

    1.2.2  检测指标和办法

    (1)超声：一切动物第1次术前和术后4周分别在麻醉下行彩超丈量胆总管管径。

    (2)肝功用：一切动物术前、术后1、3、7、14、28 d分别抽血查肝功用。检测指标包括：ALT、AST、GGT、ALP、TBIL、DBIL。

    (3)病理：一切实验动物术后4周测压终了后处死，切取SO标本用10%甲醛溶液浸泡，石蜡包埋，再停止HE染色，切片。光镜下将纤维化水平分轻、中、重度3种［3］。轻度：平滑肌内散在胶原纤维、炎性细胞浸润，平滑肌排列尚规则；中度：平滑肌中已含有较多胶原纤维和结缔组织，平滑肌组织排列不规则；重度：肌肉组织仅呈孤立小岛状，很难发现肌纤维束，四周大量胶原纤维和结缔组织，有透明变性。为到达模型的分歧性，本实验将中、重度纤维化归入实验组规范，轻度予以剔除。

    (4)SO测压办法和原理［4］：以十二指肠内压作为调零点，测压管插入SO，先使测压孔置于胆总管内，低顺应性毛细管灌注系统将灭菌纯化水以每分钟0.2 ml的速度灌注入三腔测压管内腔。SO及胆总管的压力经灌注的液体传至胃肠功用测定仪，转换为数字信号记载到计算机内保管，然后采用pullthrough法迟缓向十二指肠拖出，记载SO的周期性爬动收缩波。记载指标包括：胆总管压力、SO根底压、SO收缩幅度、SO收缩频率、SO收缩时间。每只动物记载时间为60 min。

    1.3  统计学剖析

    一切数据以±s表示，采用SPSS 10.0软件停止配对t检验和两样本t检验。P<0.05为差别有统计学意义。

    2  结果

    一切实验犬术后均存活，未呈现胆漏、十二指肠漏等严重并发症，能正常进食，自在活动，体质量无明显改动。

    2.1  胆总管管径变化

    超声丈量实验组胆总管管径，术后4周(3.63±0.14)mm与术前(3.16±0.18)mm相比明显扩张，均匀胆总管管径扩张0.47 mm(P＜0.05)。对照组术后4周(3.18±0.18)mm与术前(3.17±0.24)mm相比，差别无统计学意义(P＞0.05)。

    2.2  肝脏功用变化

    实验组TBIL、DBIL、GGT、ALP术后4周明显高于术前(P＜0.05)，AST、ALT术后3～7 d短暂升高，术后28 d与术前比拟差别无统计学意义(P＞0.05)；对照组TBIL、DBIL、GGT、ALP术后与术前比拟，差别无统计学意义(P＞0.05)，AST、ALT术后3～7 d短暂升高，术后28 d与术前比拟差别无统计学意义(P＞0.05)。

    2.3  SO狭窄的病理变化

    光镜下可见实验组括约肌内炎性细胞浸润，平滑肌组织排列紊乱，有较多的胶原纤维和结缔组织。8条实验犬均到达中重度纤维化规范。对照组SO病理检查可见平滑肌排列划一，无透明变形和纤维化(图1)。

    2.4  胆总管与SO压力变化

    与对照组相比，实验组胆总管内压力升高(P＜0.05)，SO均匀根底压升高(P＜0.05)，收缩幅度降落(P＜0.05)，收缩频率进步(P＜0.05)，收缩时间降落(P＜0.05)。见表1、图2。 表1  胆道动力学变化

    3  讨论

    目前国内外主张将SOD分为SO功用紊乱和SO狭窄两种状况。SO功用紊乱为括约肌高压带的周期性功用阻滞，是括约肌痉挛、肥大或去神经所致［1，4］。而SO狭窄的病因机制是由于胆总管炎症或小结石的长期刺激，排石过程或胆道探查操作粗暴经过乳头号惹起部分损伤、纤维化而招致括约肌狭窄。SO动力功用障碍、胆汁和胰液引流不畅、胰胆管内压增高而呈现上腹疼痛病症［5-6］。

    3.1  胜利树立SO狭窄模型

    本研讨经过自制损伤工具人为机械性损伤SO制造狭窄模型，接近临床SO狭窄发作机制。机械损伤后，SO黏膜层和肌层均呈现损伤，同时随同炎症反响。在修复过程中，SO发作纤维化、瘢痕化惹起括约肌狭窄，胆汁排出不畅，进而呈现胆管扩张，胆红素升高。为了评价损伤的分歧性，除了采用同一操作者、同一损伤工具、相同损伤次数外，还采用了病理对纤维化停止分度［3］，以中、重度纤维化为归入规范。一方面我们采用术前、术后4周彩超丈量胆总管管径，彩超结果证明实验组胆总管扩张，而对照组无明显差异；另一方面我们经过剖析术前和术后1、3、7、14、28 d的肝功用变化，其统计结果也标明术后TBIL、DBIL、GGT、ALP均明显高于术前，而对照组术前术后无明显差别。病理结果再次证明实验组SO发作纤维化，而对照组无明显变化。

    3.2  SO狭窄后胆道动力学的改动

    胆道测压是目前SOD诊断的最佳办法［7］。以往研讨标明：SOD者的测压异常表现为根底压力增高，收缩频率、收缩幅度等增加［8］。而依据我们的实验研讨发现，SO器质性狭窄后胆总管内压、SO根底压均有显著升高，收缩频率增加，但收缩的幅度降落。我们以为狭窄后胆道梗阻，括约肌纤维化、瘢痕构成、挛缩形成胆总管内压力和括约肌根底压力的升高，但发作器质性损伤的括约肌组织发作纤维化，其弹性降落，收缩才能低于正常肌纤维组织才形成了SO狭窄后收缩幅度的降落。从而与因括约肌痉挛或去神经等所致的括约肌功用紊乱形成的高波幅相区别。而SO在收缩频率和收缩时间的改动可能和括约肌组织损伤纤维化后形成的收缩紊乱有关。

    3.3  临床意义

    综上所述，本实验从胆道动力学上停止剖析，找到了局部特征性改动，并做出了较为合理的解释。近年来，国内外胆道测压在临床已开端应用，但尚无明白的辨别狭窄和功用紊乱的规范。有研讨标明，SOD的主要治疗办法，内镜下括约肌切开术(endoscopic sphincterotomy，EST)关于SO根底压升高、造影剂排泄时间延长、血清酶学改动明显及胆管扩张者效果显著，术后腹痛、发热、黄疸等病症根本消逝；对只要根底压升高和胆管扩张者，EST疗效略差；仅有胆管扩张者，疗效最差［9-10］。关于间歇性SO运动障碍或痉挛,静息时胆总管SO根底压正常者(<40 mm Hg)，行EST效果并不肯定。也有研讨指出SO功用性紊乱可为平滑肌松弛剂所缓解［11］。以上均阐明关于SO器质性狭窄和功用性紊乱的治疗方向是不一样的，而如何区别两者对临床治疗来讲是有重要意义的。

【参考文献】
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