铁心甘草醇提物对小鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其机制探讨

　【摘要】 目的 察看死心甘草醇提物对小鼠离体子宫平滑肌收缩运动的影响及作用机制。办法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制备离体子宫标本，察看死心甘草醇提物对离体子宫平滑肌的作用，以及参加盐酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、盐酸维拉帕米、吲哚美辛对死心甘草作用的影响。结果 死心甘草醇提物(0.4、0.6、0.8g/L)可显著抑止未孕小鼠离体子宫平滑肌的自发性收缩活动。盐酸维拉帕米和吲哚美辛对死心甘草舒张小鼠离体子宫平滑肌的作用具有显著性影响。甲磺酸酚妥拉明可增加死心甘草的作用时间，但不能增加死心甘草的作用强度。盐酸苯海拉明对死心甘草抑止子宫平滑肌的作用无显著性影响。结论 死心甘草醇提物具有松弛小鼠离体子宫平滑肌的作用，该作用可能与α受体、抑止细胞内钙库释放及抑止前列腺素的合成和释放有关。

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　　【关键词】 死心甘草醇提物 小鼠 子宫平滑肌 机制

　　死心甘草为豆科植物甘草的根和根茎心部局部，质地坚硬呈紫黑色，产于西北各省区，我区主产于盐池、灵武等县。微苦、甘、平。功用和中缓急、理气止痛。民间用于治疗急性肠炎、胃炎、呕吐、腹泻及妇女痛经等[1]。侯玲玲、赵自强等研讨显现，此药用于治疗痛经具有良好的临床疗效[2]。本研讨察看死心甘草醇提物对小鼠子宫平滑肌的作用并对其作用机制停止初步的讨论。

　　1 资料与办法

　　1.1 动物 昆明种小鼠60只，雌性，未孕，体重25～30g。由宁夏医科大学实验动物中心提供。

　　1.2 仪器 Biolap 420E+生物信号采集系统(成都泰盟科技有限公司)，FT-100 生物张力传感器(成都泰盟科技有限公司)，超级恒温水浴(KAYAGAKI IRIKA KOGYO CO.LTD.)。

　　1.3 药品及制备 死心甘草醇提物(宁夏药检所王英华提供)，己烯雌酚注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批号：12020536)，盐酸苯海拉明注射液(天津市战争制药厂，批号：800712)，甲磺酸酚妥拉明注射液(上海旭东海普药业有限公司，批号：31020589)，盐酸维拉帕米注射液(上海禾丰制药有限公司，批号：31021343)，吲哚美辛(上海第十七制药厂，批号：840303)。吲哚美辛于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L盐酸滴定至pH为7.4。4种药品分别制备为2×10-6 mol/L、2×10-6 mol/L、2×10-7 mol/L、2×10-5 mol/L终浓度的溶液。

　　1.4 实验办法 实验前3d，按 0.025mg/10g 体重给小鼠腹腔注射己烯雌酚，隔天1次，共2次，以进步子宫对药物的敏理性。用颈椎脱臼法将小鼠处死，剪开腹腔，揭起肠管及网膜，可见淡粉色的索状子宫，左右各一。悄悄别离，然后结扎两侧子宫远近端，剪断底部，取出子宫置于含5mL Kreb\'s液的恒温浴槽内，将子宫一端固定在玻璃挂钩上，另一端与张力传感器相连，张力调到0.5g。恒温浴槽内的温度坚持(37±0.5)℃，并不时通入95%氧气+5%二氧化碳的混合气体，60～70个气泡/min。

　　将子宫标本随机分为三组：正常对照组、死心甘草组及受体拮抗剂+死心甘草组。各组待子宫的自发活动平稳30min后，记载给药前正常的子宫收缩曲线10min，然后各组分别参加不同的药物。子宫平稳的自发活动(即不参加任何药物)为正常对照组，累计参加死心甘草醇提物(以下简称死心甘草)100 g/L 10μL使其终浓度(指溶于浴槽中5mL溶液后的浓度)分别为0.2、0.4、0.6、0.8 g/L，为死心甘草组。受体拮抗剂+死心甘草组即：子宫的自发活动平稳后分别参加盐酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、盐酸维拉帕米、吲哚美辛5min后，再参加死心甘草(0.6 g/L)。用 Biolap 420E+生物信号采集系统记载子宫平滑肌收缩运动，各组分别察看和记载给药前后5min内的子宫平滑肌收缩的频率、幅度和收缩距离的持续时间，停止比拟。

　　1.5 统计学办法 数据以(±s)表示，运用SPSS 10.0软件停止方差剖析，以P<0.05为差别有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 死心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

　　与正常对照组相比，死心甘草随剂量增加可逐步削弱子宫平滑肌自发收缩运动，收缩波的频率减慢，振幅减小，收缩波距离的持续时间增加，见表1。

　　表1 死心甘草对小鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响(略)

　　*与对照组比拟*P<0.05

　　2.2 运用拮抗剂后死心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响

　　盐酸维拉帕米和吲哚美辛均可加强死心甘草抑止子宫平滑肌的作用，表现为子宫平滑肌的收缩频率减小、收缩振幅降低及收缩波距离的持续时间延长，其与死心甘草组相比差别均具有统计学意义;α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明可延长子宫平滑肌收缩距离的持续时间，而对收缩频率和收缩振幅均无显著性影响;H1受体阻断剂盐酸苯海拉明，可削弱死心甘草对子宫平滑肌的作用，表现为收缩振幅增大，且收缩频率和收缩波距离的持续时间与死心甘草组相比差别无统计学意义，见表2。

　　表2 运用拮抗剂后死心甘草对小鼠离体子宫平滑肌作用的影响(略)

　　与死心甘草组比拟*P<0.05;与正常对照组比拟△P<0.05

　　3 讨论

　　原发性痛经是由于各种缘由招致子宫肌肉不规则痉挛性收缩而惹起，目前医学界对其发病机制还不完整分明，但普遍以为痛经的发作与体内前列腺素F2α(p rostaglandinF2α，PGF2α)、缩宫素(催产素，oxytocin)、血管加压素等过高惹起子宫过度收缩有关[7-8]。痛经患者普遍随同子宫过度收缩、宫内压升高、子宫部分缺血和血流不畅，以及由此所惹起的下腹部疼痛等病症。死心甘草具有缓急、止痛之功。动物实考证明，死心甘草对动物离体和在体的子宫平滑肌均具有明显的舒张作用，并能对立催产素和MPGF2α惹起的子宫猛烈收缩[1-2]。理论证明，死心甘草对痛经及痛经伴发的胃肠道反响有牢靠的治疗作用[2]。本实验结果显现，死心甘草醇提物可抑止小鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动。参加α受体阻断剂甲磺酸酚妥拉明后，子宫平滑肌收缩距离的持续时间延长，且与死心甘草组相比具有统计学意义，但其收缩频率和收缩振幅与死心甘草组相比均无统计学意义，因而，提示为甲磺酸酚妥拉明可增加死心甘草作用的时间，但不能增加死心甘草的作用强度，其作用机制也可能与α受体有关。在参加前列腺素合成酶抑止剂吲哚美辛后，死心甘草的抑止作用与死心甘草组相比差别有统计学意义，提示死心甘草的抑止作用可能也与前列腺素的合成与释放有关。在运用L型电压依从性Ca2+通道(L-VDCC)阻断剂盐酸维拉帕米后，与死心甘草组相比，死心甘草舒张子宫平滑肌的作用亦具有统计学意义，提示死心甘草的抑止作用也可能与抑止细胞内钙库释放有关。有报道[9]，细胞外Ca2+主要经过L-VDCC进入细胞内，该通道常随动作电位的发作而开放。L-VDCC是平滑肌兴奋收缩耦联的重要局部，胞浆内游离Ca2+浓度是肌肉收缩蛋白活动的决议性调理剂[5]。参加H1受体阻断剂盐酸苯海拉明后，离体子宫平滑肌收缩的振幅加大，并且其收缩频率和收缩波距离的持续时间与死心甘草组相比均无统计学意义，提示死心甘草的抑止作用与H1受体无关。本实验结果提示，死心甘草醇提物抑止小鼠子宫平滑肌收缩运动的作用可能与α受体及通道L-VDCC使平滑肌细胞内Ca2+浓度降低有关，也与前列腺素的合成与释放有关。

　　【参考文献】

　　[1] 赵自强，高保京，韩生银，等.死心甘草对大鼠离体子宫的作用研讨[J].宁夏医学院学报，1996，18(1)：20-23.

　　[2] 赵自强，牛阳，韩生银，等.死心甘草治疗痛经药理作用的实验研讨[J].中国中医药科技，1995，2(6)：26-27.

　　[3] 李志强，马力扬，徐敬东，等.香附对未孕大鼠离体子宫肌收缩的影响[J].西安交通大学学报(医学版)，2007，28(4)：399-400.

　　[4] 徐敬东，王文，秦晓民.远志加强未孕大鼠子宫平滑肌运动的机制研讨[J].中国中药杂志，2005，30(4)：295-297.

　　[5] 徐敬东，王文，杨惠霞，等.延胡索对未孕大鼠离体子宫平滑肌运动的抑止作用[J].中国组织工程研讨与临床康复，2007，11(21)：4178-4181.

　　[6] 赵丁，詹文红，李连怀，等.生化汤提取物对正常未孕、雌激素预处置及产后小鼠离体子宫平滑肌收缩功用的影响[J].中国中药杂志，2006，31(3)：243

　　[7] Lundstrêm V，Gréen K.Endogenous levels of prosta2 glandin F2alpha and itsmain metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic women[J].Am J Obstet Gynecol，1978，130(6)：640-646.

　　[8] AkerlundM.Involvement of oxytocin and vasop ressin in the pathophysiology of preterm labor and primary dys2 menorrhea[J].Prog Brain Res，2002，139(4)：359-365.

　　[9] Zhenyu C，Qinghuiqi，LixinL，et al.Effects of emodin on Ca2+ signal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunction syndrome[J].J Surg Res，2006，131(1)：80-85.