CD4+CD25+调节性T细胞对HCV感染者疾病进程影响的研究

　【摘要】 目的：探讨HCV感染者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达状况以及与疾病进程的相关性。方法：选取HCV感染者69例及健康对照23例，应用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达。结果：HCV感染组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例明显高于对照组(P<0.01);慢性感染组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例高于HCV无症状携带组(P<0.05);肝硬化组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例高于慢性感染组(P<0.05)。结论：HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与疾病进程具有相关性。  

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　　【关键词】 丙型肝炎病毒;CD4+CD25+调节性T细胞;疾病进程

　　Study　on　the　Impact　of　CD4+CD25+　Regulatory　T　Cells　on　the　Progression　of　Hepatitis　C　Virus　Infection

　　SHEN　Shuxu1，WU　Yuhai2，GUAN　Qi3，LIU　Ying1

　　(1.Laboratory　of　Central　Hospital　of　Yingkou，Yingkou 115000，China;2.Laboratory　of　Chinese　Medicine　Hospital　of　Lingyuan;3.Laboratory　of　Fengtian　Hospital　Affiliated　to　Shengyang　Medical　College)

　　AbstractObjective：To　investigate　the　expression　of　peripheral　blood　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　in　patients　with　hepatitis　C　and　its　relationship　with　progression　of　disease.Methods：Technique　of　flow　cytometry　was　used　to　detect　peripheral　blood　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　of　69　patients　with　Hepatitis　C　and　23　controls.Results：The　percentage　of　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　was　significantly　higher　in　patients　with　hepatitis　C　than　those　in　healthy　controls　(P<0.01).The　chronic　hepatitis　C　group　had　a　higher　percentage　of　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　than　that　of　asymptomatic　carrier　(P<0.05)and　the　group　of　patients　with　liver　cirrhosis　had　a　higher　percentage　of　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　than　that　of　chronic　hepatitis　C　group(P<0.05).Conclusion：Peripheral　blood　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　levels　are　correlated　with　the　progression　of　HCV　infection.

　　Key　wordsHCV;CD4+CD25+　regulatory　T　cells;disease　progression

　　丙型肝炎呈世界性分布，全球约有超过1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV)，且70%～90%形成慢性感染[1]，30%发展为进展性肝病，包括肝硬化或肝癌[2];我国HCV的感染率约为3.2%[3]。研究急性自限性HCV感染患者和猩猩表明，有效控制HCV感染需要一个持久、广泛的CD4+Th细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应，而慢性丙型肝炎患者的HCV特异性T细胞数量减少，对抗原刺激的增生能力显著降低[4]。近来研究显示，在HCV感染中能够诱导宿主上调表达一群CD4+CD25+调节性T细胞，这类抑制性T细胞群具有免疫抑制功能，主要分泌细胞因子IL10和TGFβ，激活后的CD4+CD25+调节性T细胞能够通过依赖细胞接触的方式抑制CD4+和CD8+T细胞的增生、分化以及分泌细胞因子[4]，从而导致机体无法有效地清除病毒，以至于感染的慢性化。由于HCV感染所致的不同临床结局与机体的免疫状态密切相关[5]，因此本研究拟以不同疾病进展阶段的HCV感染患者为研究对象，对其外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平进行检测，以探讨HCV感染后CD4+CD25+调节性T细胞对HCV感染疾病进程的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 样本和试剂 69例HCV感染者均来自本院门诊和住院患者，其中男42例，女27例;年龄21～68岁，平均(36.6±9.6)岁。病例诊断均符合2004年中华医学会传染病和寄生虫病学分会、肝病学分会联合制订的丙型肝炎防治指南[5]。其中HCV无症状携带组23例，为HCV抗体阳性，肝功及肝脏影像学正常的患者;HCV慢性感染组27例，为HCV抗体阳性，丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高而无肝硬化的患者;HCV感染后肝硬化组19例，为HCV抗体阳性，影像学检查合并肝硬化的患者;同时排除合并其他类型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染以及酒精性肝病等。另选年龄和性别与患者相匹配的健康志愿者23例作为正常对照(health　control，HC)。单克隆抗体有CD3PreCP、CD4APCCy7、CD25　PECy5(购于Becton　Dickinson公司)。

　　1.2 方法 采静脉血2　ml，EDTA抗凝。经反向加样法加入50　μl抗凝血，分别加入CD3PreCP、CD4APCCy7、CD25　PECy5单克隆抗体，室温避光15　min，加入免洗溶血素450　μl，室温避光15　min，FACS　MULTISET软件检测并自动分析。

　　1.3 统计学处理 所有资料采用SPSS16.0软件系统进行分析。数据采用x±s表示，HCV感染组及健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞水平比较采用方差分析，LSD法进行感染组间两两比较。

　　2 结果

　　2.1 HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与健康对照组的比较 HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例为7.4%±2.0%，健康对照组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例为4.4%±2.1%，HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例较健康对照组显著增高(t=4.741，P<0.0l)。

　　2.2 HCV感染者各组及健康对照组间外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平的比较 表1结果显示，HCV感染者各组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例均高于健康对照组;慢性感染组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例高于无症状携带组(P<0.05);肝硬化组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例高于慢性感染组(P<0.05)。表1 HCV感染各组和健康对照组外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例(x±s)

　　3 讨论

　　CD4+CD25+调节性T细胞的主要作用是抑制T细胞增殖及维持自身免疫耐受，对CD4+T细胞、CD8+T细胞、免疫记忆细胞及抗原提呈细胞(APC)等均有广泛的免疫抑制作用，导致各种细胞因子分泌减少及细胞免疫功能减弱[6]。有研究显示，慢性HCV感染能够诱导宿主上调表达CD4+CD25+调节性T细胞，抑制抗原特异性CD4+T细胞反应，而去除CD4+CD25+调节性T细胞能够显著降低这些病原体的感染率[6，7]。另有研究显示，持续性HCV感染患者CD4+CD25+调节性T细胞表达增加，抑制活性增强，特异性抑制CD4+T细胞反应[8]。本研究结果表明，HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达水平明显高于健康对照组，提示HCV感染后CD4+CD25+调节性T细胞抑制体内免疫系统功能，使机体不能及时有效的清除病毒，从而导致疾病慢性化。本研究发现，从健康对照组、无症状携带者、慢性感染组到肝硬化组，CD4+CD25+调节性T细胞所占比例随疾病进展而逐渐增高，提示HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞介导的免疫耐受和HCV感染后疾病进展程度密切相关，可能直接参与肝脏免疫损伤的发生过程。因此，外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平是一个较好地反映细胞免疫功能的参考指标，可以用于临床免疫功能的监测，也可以用于HCV感染后疾病进展及预后的判断。

　　【参考文献】

　　[1]HepatitisC[EB/OL].WorldHealthOrganization，2002.www.who.int/csr/disease/hepatitis/Hepc.pdf.

　　[2]Thomson　BJ，Finch　RG.Hepatitis　C　virus　infection[J].Clin　Microbiol　Infect，2005，11(2)：86-94.

　　[3]佚名.丙型肝炎防治指南[J].中华肝脏病杂志，2004，12(4)：194-198.

　　[4]Asseman　C，von　Herrath　M.About　CD4pos　CD25pos　regulatory　cells[J].Autoimmun　Rev，2002，1：190-119.

　　[5]中华医学会肝病学分会、传染病和寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J].中华传染病杂志，2004，22：131-136.

　　[6]Aandahl　EM，Miehaelsson　J，Moretto　WJ，et　al.Human　CD4+CD25+　regulatory　T　cells　control　Tcell　responses　to　human　immunodeficiency　virus　and　eytomegalovirus　antigens[J].J　Virol，2004，78：2454-2459.

　　[7]Mendez　S，Reckling　SK，Piccirillo　CA，et　al.Role　for　CD4+　CD25+　regulatory　T　cells　in　reactivation　of　persistent　leishmaniasis　and　control　of　concomitant　immunity[J].J　Exp　Med，2004，200：201-210.

　　[8]杨江华，张永祥，喻荣彬，等.CD4+CD25+调节性T细胞抑制持续性丙型肝炎病毒感染患者CD4+T细胞反应[J].中华内科杂志，2006，45(1)：29-33